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詳細介紹
| 品牌 | 普美生物 | 貨號 | PMK1878 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 48T/96T | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 肌酐檢測 | 應用領域 | 綜合 |
一、產品規格
產品名稱：creatinine檢測試劑盒
品牌：普美生物
貨號：PMK1878
規格：48T/96T
二、產品基本介紹
creatinine檢測試劑盒
creatinine（creatinine，Cr）是肌肉在人體內代謝的產物，主要由腎小球濾過排出體外。血中的creatinine來源包括外源性和內源性兩部分。外源性creatinine
是肉類食物在體內代謝后的產物；內源性creatinine是體內肌肉組織代謝的產物。血creatinine幾乎全部經腎小球濾過進入原尿，并且不被腎小管重吸收；內源性creatinine每日生成量幾乎保持恒定，嚴格控制外源性creatinine的攝入時，血creatinine濃度為穩定值，因此，測定血creatinine濃度可以反映腎小球的濾過功能。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法，用于檢測樣本中creatinine含量。其原理是：creatinine酶可催化creatinine產生肌酸，肌酸酶催化肌酸產生肌氨酸和尿素。肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化產生過氧化氫，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基phenazone偶聯酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰。測500nm處的吸光值，即可測定樣品中creatinine含量。
產品內容：
試劑盒組分 | 規格 | 儲存條件 | ||
48T | 96T | |||
提取液 | 10mL | 20mL | 4℃保存 | |
試劑一 | 7.5mL | 15mL | 4℃避光保存 | |
試劑二 | 1 | 1 | -20℃避光保存 | |
試劑三 | 5mL | 10mL | 4℃保存 | |
標準品（10mgcreatinine） | 粉劑×1支 | 粉劑×1支 | 4℃保存 | |
自備耗材：
酶標儀或可見分光光度計（能測500nm處的吸光度）
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
試劑準備：
提取液：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。
試劑一：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。
試劑二：臨用前96T加入5mL 試劑三，48T加入2.5mL 試劑三充分混勻待用。用不完的試劑可4℃保存一周或分裝后-20℃保存，避免反復凍融。
試劑三：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。
工作液的配制：每孔配制200µL工作液：吸取50µL溶解后的試劑二，150µL 試劑一。工作液需現配現用，根據需要測定的樣本數按比例配制。
標準品：含10 mgcreatinine，臨用前加入1mL去離子水溶解得10 mg/mL標準品。溶解后的標準品可4℃保存1個月或分裝-20℃長期保存。
標準曲線設置：按下表所示，用去離子水將10mg/mL標準品稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標準溶液。
標準品體積（µL） | 去離子水體積（µL） | 標準品濃度（mg/mL） | |
標準品1 | 8µL 10mg/mL | 192 | 0.4 |
標準品2 | 100µL of 標準品1 (0.4mg/mL) | 100 | 0.2 |
標準品3 | 100µL of 標準品2 (0.2mg/mL) | 100 | 0.1 |
標準品4 | 100µL of 標準品3 (0.1mg/mL) | 100 | 0.05 |
標準品5 | 100µL of 標準品4 (0.05mg/mL) | 100 | 0.025 |
標準品6 | 100µL of 標準品5 (0.025mg/mL) | 100 | 0.0125 |
標準品7 | 100µL of 標準品6 (0.0125mg/mL) | 100 | 0.00625 |
注意：每次實驗，請使用新配制的標準品。
樣品制備：
動物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴勻漿，12,000g，4℃離心10min，取上清液待測。
細胞或細菌：收集500萬細胞或細菌到離心管內，用冷PBS清洗細胞或細菌，離心后棄上清，加入1mL提取液，冰浴超聲波破碎細胞5min（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s，重復30次），然后12,000g，4℃離心10min，取上清待測。
血清（漿）、尿液等液體樣本：直接測定。
注意：推薦使用新鮮血清樣本，如果不立即進行實驗，樣本可在-80℃保存6個月。如需測定蛋白濃度，推薦使用BCA蛋白質定量試劑盒進行樣本蛋白質濃度測定。
實驗步驟：
1. 酶標儀或可見分光光度計預熱30min以上，調節波長到500nm，可見分光光度計去離子水調零；恒溫箱預熱到37℃。
2. 樣本測定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑）：
標準（μL） | 空白（μL） | 測定（μL） | 對照（μL） | |
不同濃度標準品 | 20 | 0 | 0 | 0 |
樣本 | 0 | 0 | 20 | 20 |
去離子水 | 0 | 20 | 0 | 0 |
工作液 | 200 | 200 | 200 | 0 |
試劑三 | 0 | 0 | 0 | 200 |
混勻，37℃靜置60min，測定500nm 處吸光值A。空白孔記為A空，標準孔記為A標，測定孔記為A測，對照孔記為A對。計算ΔA測=A測-A對，ΔA標=A標-A空。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果ΔA小于0.005可適當加大樣本量。如果ΔA大于 1.0，樣本可用提取液適當稀釋，計算結果乘以稀釋倍數，或減少提取用樣本量。
結果計算：
1. 標準曲線的繪制
以標準液濃度為y軸，ΔA標為x軸，繪制標準曲線（濃度為y軸更方便計算結果）。將ΔA測帶入方程得到y值（mg/mL）。
2. creatinine含量計算
1）按照樣本鮮重計算
creatinine含量（mg/g 鮮重）=y×V樣÷(W×V樣÷V樣總)×n=y÷W×n
2）按照細菌或細胞數量計算
creatinine含量（mg/104 cell）=y×V樣÷(細胞數量×V樣÷V樣總)×n=y÷500×n=0.002×y×n
3）按照液體體積計算
creatinine含量（mg/mL）=y×V樣÷V樣×n=y×n
4）按照蛋白濃度計算
creatinine含量（mg/mg prot）= y×V樣÷(V樣×Cpr) ×n=y÷Cpr×n
V樣：加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；n：樣本稀釋倍數； Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；500：細胞數量，500萬。
三、品牌介紹
湖北普美生物科技有限公司成立于2022年，專注于生命科學領域的產品研發、生產與銷售。公司以“創新驅動、品質為先"為理念，致力于為科研人員提供高品質的科研工具和技術支持，助力生命科學研究的發展。依托的科研團隊和創新的生產技術，截至目前，公司已發表學術論文千余篇，擁有自主知識產權的超過百項。普美生物建立有的生產和質控體系，確保產品質量穩定可靠。公司主要產品涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學及生物化學等多個領域，滿足不同科研需求。此外，普美生物還積極與高校和科研機構合作，共同推動前沿技術的轉化與應用。展望未來，湖北普美生物將繼續秉持“為科學家提供可信賴的科研工具"的宗旨，力求成為生命科學領域的企業。我們期待與*的科研機構和合作伙伴攜手并進，共同為人類健康與生命科學的進步貢獻力量。
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